MISE AU POINT D’UNE METHODE DE CONTROLE PRE-LIBERATOIRE DE L’AFLIBERCEPT AU SEIN D’UNE UNITE DE PREPARATION DES CHIMIOTHERAPIES (UPC)
Réf. 065 PT
Daphné MOREL1, Maxime LEROY1, Armel SARRAZIN1, Sandrine EDET1, Marthe RIGAL1, Anne JACOLOT1, Christophe PADOIN1
1 : Pharmacie à Usage Intérieur, Avicenne, 125 Route de Stalingrad, 93000 Bobigny
Résumé du poster
Introduction : La prise en charge thérapeutique des cancers solides et hématologiques est en pleine évolution avec l’augmentation progressive des traitements par thérapies ciblées. La complexification des molécules pose le problème de l’analyse pré-libératoire exhaustive des préparations en UPC et des techniques de contrôle analytique. L’exemple de l’aflibercept, une macromolécule complexe de 115 kDa issue de la fusion entre une glycoprotéine et un fragment Fc de l’IgG1 humaine, est donné ici.
Matériels & méthode : L’analyse est effectuée par spectrométrie d’absorption UV-visible couplée à une spectrométrie d’émission Raman sur QC-Prep+.
L’identité est déterminée à l’aide de bibliothèques spectrales intégrant cytotoxiques, anticorps monoclonaux et macromolécules. QC-Prep+ calcule le pourcentage de ressemblance spectrale puis attribue à l’échantillon l’identité associée à la meilleure valeur. L’échantillon est quantifié à partir d’une gamme d’étalonnage préalablement réalisée à la longueur d’onde optimale de quantification définie. Dans la pratique, la concentration de la solution finale à perfuser est comprise entre 1,5 et 4 mg.mL-1. Le solvant utilisé est du chlorure de sodium à 0,9 %. La linéarité est testée sur une gamme de 5 échantillons à des concentrations s’échelonnant de 1,00 à 5,00 mg.mL-1. La précision et la répétabilité de la méthode sont vérifiées pour 3 concentrations cibles (1,25, 2,5 et 3,125 mg.mL-1). La spécificité est évaluée.
Résultats & discussion : L’aflibercept est identifié en Raman. La linéarité a été démontrée en UV à λ = 215 nm pour une étendue de 1,00 à 3,75 mg.mL-1. Le coefficient de corrélation obtenu est de r² = 0,99999 avec un ratio performance/déviation de 226,2. On obtient respectivement pour les 3 concentrations un coefficient de variation (CV) de 0,16 %, 0,32 % et 0,10 % et un biais de 2,21 %, 0,97 % et -0,78 %. La spécificité est évaluée au quotidien par l’intégration des spectres aux bibliothèques générales et spécifiques aux anticorps monoclonaux du QC-Prep+. A ce jour, aucune molécule n’a été faussement identifiée en tant qu’aflibercept (environ 4000 échantillons).
Conclusion : La méthode d’identification et de quantification de l’aflibercept validée ici est linéaire, répétable et spécifique. A l’heure actuelle, le contrôle analytique qualitatif des anticorps monoclonaux, des anthracyclines et des vinca-alcaloïdes peut présenter un défaut de spécificité intra-classe. L’optimisation de l’identification est obtenue grâce à la spectrométrie Raman et la détermination de bandes spectrales les plus discriminantes possible. La solution retenue nous permet l’identification et la quantification de 48 molécules, dont 8 anticorps monoclonaux et une macromolécule, l’aflibercept.
Mots clés : Contrôle analytique pré-libératoire, Spectrométrie Raman, Aflibercept
Matériels & méthode : L’analyse est effectuée par spectrométrie d’absorption UV-visible couplée à une spectrométrie d’émission Raman sur QC-Prep+.
L’identité est déterminée à l’aide de bibliothèques spectrales intégrant cytotoxiques, anticorps monoclonaux et macromolécules. QC-Prep+ calcule le pourcentage de ressemblance spectrale puis attribue à l’échantillon l’identité associée à la meilleure valeur. L’échantillon est quantifié à partir d’une gamme d’étalonnage préalablement réalisée à la longueur d’onde optimale de quantification définie. Dans la pratique, la concentration de la solution finale à perfuser est comprise entre 1,5 et 4 mg.mL-1. Le solvant utilisé est du chlorure de sodium à 0,9 %. La linéarité est testée sur une gamme de 5 échantillons à des concentrations s’échelonnant de 1,00 à 5,00 mg.mL-1. La précision et la répétabilité de la méthode sont vérifiées pour 3 concentrations cibles (1,25, 2,5 et 3,125 mg.mL-1). La spécificité est évaluée.
Résultats & discussion : L’aflibercept est identifié en Raman. La linéarité a été démontrée en UV à λ = 215 nm pour une étendue de 1,00 à 3,75 mg.mL-1. Le coefficient de corrélation obtenu est de r² = 0,99999 avec un ratio performance/déviation de 226,2. On obtient respectivement pour les 3 concentrations un coefficient de variation (CV) de 0,16 %, 0,32 % et 0,10 % et un biais de 2,21 %, 0,97 % et -0,78 %. La spécificité est évaluée au quotidien par l’intégration des spectres aux bibliothèques générales et spécifiques aux anticorps monoclonaux du QC-Prep+. A ce jour, aucune molécule n’a été faussement identifiée en tant qu’aflibercept (environ 4000 échantillons).
Conclusion : La méthode d’identification et de quantification de l’aflibercept validée ici est linéaire, répétable et spécifique. A l’heure actuelle, le contrôle analytique qualitatif des anticorps monoclonaux, des anthracyclines et des vinca-alcaloïdes peut présenter un défaut de spécificité intra-classe. L’optimisation de l’identification est obtenue grâce à la spectrométrie Raman et la détermination de bandes spectrales les plus discriminantes possible. La solution retenue nous permet l’identification et la quantification de 48 molécules, dont 8 anticorps monoclonaux et une macromolécule, l’aflibercept.
Mots clés : Contrôle analytique pré-libératoire, Spectrométrie Raman, Aflibercept