DÉVELOPPEMENT ET VALIDATION D’UNE MÉTHODE DE DOSAGE DE GÉLULES PÉDIATRIQUES DE LÉVOFLOXACINE HÉMIHYDRATE
Réf. 033 PT
Julia ROUSSEAU1, Lucie LE MEUR1, Thibaut CHOUQUET1, Joëlle BORDENAVE1, Guy BENOIT1
1 : Département pharmacotechnie, Armand Trousseau - GH HUEP, AP-HP, 26 Avenue du Dr Arnold Netter, 75012 Paris
Résumé du poster
Introduction : La lévofloxacine est indiquée dans la prise en charge de la tuberculose multirésistante chez l´enfant à la posologie de 15 mg/kg/jour en une prise unique. En l´absence de spécialités adaptées à l´enfant, des gélules de lévofloxacine dosées entre 50 et 300 mg sont réalisées au préparatoire. L’objectif de ce travail est de développer et de valider une méthode de dosage de ces préparations, afin de pouvoir réaliser en routine un essai de teneur.
Matériels & méthode : Les préparations sont composées de lévofloxacine hémihydrate et de cellulose microcristalline dans des gélules de gélatine de couleur ivoire ou verte et blanche. Le dosage est réalisé par chromatographie liquide haute performance (HPLC) en polarité de phase inversée avec une colonne RP18 endcapped (LiChrospher 100® 5 µm, 125 x 4,6 mm) thermostatée à 30°C. La phase mobile est composée de tampon phosphate à pH 3 (20 mM K2HPO4 + 1 ml de triéthylamine, ajusté avec de l´acide orthophosphorique) et de l´acétonitrile (84:16 v/v) à 1,5 ml/min. Le volume d´injection est de 20 µL et le temps d´analyse est de 6 min. La détection est réalisée avec un spectrophotomètre à barrettes de diodes, dans l´UV à 294 nm. La méthode est validée selon les recommandations des ICH : deux gammes d´étalonnage composées de cinq points (de 30 à 70 mg/L), avec et sans excipients, ainsi que six contrôles qualités à 50 mg/L sont réalisés à J1, J2 et J3. Chaque point de gamme est préparé à partir d´une pesée indépendante. Ont été évaluées la linéarité, la spécificité, la fidélité et l´exactitude.
Résultats & discussion : Le temps de rétention est de 3,6 ± 0,4 min. L´analyse des variances montre une linéarité dans le domaine 30-70 mg/L avec un coefficient de corrélation R2= 0,988. Les coefficients de variations de la répétabilité (2,33 %) et de la fidélité intermédiaire (2,76 %) sont inférieurs à 5 %, la méthode est fidèle. L´intervalle de confiance du taux de recouvrement est [98,93-101,13], la méthode est exacte. La comparaison statistique des deux gammes d´étalonnage (pentes et ordonnées à l´origine), avec ou sans excipients, selon le test t de Student (α= 5 %) ne montre pas de différences significatives, la méthode est spécifique.
Conclusion : La méthode de dosage est linéaire, spécifique, fidèle et exacte selon les recommandations des ICH. Elle va permettre de réaliser des essais de teneur des préparations de lévofloxacine faites dans le cadre de la prise en charge de la tuberculose multirésistante chez le patient pédiatrique. La méthode développée pourra être utilisée pour mettre au point et déterminer la stabilité d´une nouvelle forme galénique de lévofloxacine, une forme orale liquide, facilitant l´adaptation posologique.
Mots clés : lévofloxacine, gélule, pédiatrie, HPLC, pharmacotechnie
Matériels & méthode : Les préparations sont composées de lévofloxacine hémihydrate et de cellulose microcristalline dans des gélules de gélatine de couleur ivoire ou verte et blanche. Le dosage est réalisé par chromatographie liquide haute performance (HPLC) en polarité de phase inversée avec une colonne RP18 endcapped (LiChrospher 100® 5 µm, 125 x 4,6 mm) thermostatée à 30°C. La phase mobile est composée de tampon phosphate à pH 3 (20 mM K2HPO4 + 1 ml de triéthylamine, ajusté avec de l´acide orthophosphorique) et de l´acétonitrile (84:16 v/v) à 1,5 ml/min. Le volume d´injection est de 20 µL et le temps d´analyse est de 6 min. La détection est réalisée avec un spectrophotomètre à barrettes de diodes, dans l´UV à 294 nm. La méthode est validée selon les recommandations des ICH : deux gammes d´étalonnage composées de cinq points (de 30 à 70 mg/L), avec et sans excipients, ainsi que six contrôles qualités à 50 mg/L sont réalisés à J1, J2 et J3. Chaque point de gamme est préparé à partir d´une pesée indépendante. Ont été évaluées la linéarité, la spécificité, la fidélité et l´exactitude.
Résultats & discussion : Le temps de rétention est de 3,6 ± 0,4 min. L´analyse des variances montre une linéarité dans le domaine 30-70 mg/L avec un coefficient de corrélation R2= 0,988. Les coefficients de variations de la répétabilité (2,33 %) et de la fidélité intermédiaire (2,76 %) sont inférieurs à 5 %, la méthode est fidèle. L´intervalle de confiance du taux de recouvrement est [98,93-101,13], la méthode est exacte. La comparaison statistique des deux gammes d´étalonnage (pentes et ordonnées à l´origine), avec ou sans excipients, selon le test t de Student (α= 5 %) ne montre pas de différences significatives, la méthode est spécifique.
Conclusion : La méthode de dosage est linéaire, spécifique, fidèle et exacte selon les recommandations des ICH. Elle va permettre de réaliser des essais de teneur des préparations de lévofloxacine faites dans le cadre de la prise en charge de la tuberculose multirésistante chez le patient pédiatrique. La méthode développée pourra être utilisée pour mettre au point et déterminer la stabilité d´une nouvelle forme galénique de lévofloxacine, une forme orale liquide, facilitant l´adaptation posologique.
Mots clés : lévofloxacine, gélule, pédiatrie, HPLC, pharmacotechnie