MISE AU POINT D’UNE MÉTHODE DE DOSAGE PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE DE HAUTE PERFORMANCE (CLHP) DE LA TENEUR EN ACIDE ACÉTYLSALICYLIQUE DES LOTS DE GÉLULES PRODUITES
Réf. 017 PT
Ananthy KIDDINAN1, Lucia TILIP ET1, Nathalie PONS-KERJEAN 1, Jeanick STOCCO1
1 : PHARMACIE, BEAUJON, 100 Boulevard général Leclerc , 92110 Clichy
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Résumé du poster
Introduction : Le préparatoire de la pharmacie produit des gélules de 5 et 20 mg d’acide acétylsalicylique (Asp) pour désensibilisation effectuée par le service d’allergologie. La réalisation d’une préparation hospitalière par lot de 100 gélules permettrait un gain de temps mais nécessite le contrôle libératoire du principe actif qui se doit d’être simple et rapide.
L’objectif est de développer une méthode de dosage de l’Asp afin de libérer les lots produits.
Matériels & méthode : Premièrement, nous avons choisi le meilleur solvant en fonction de la solubilisation et de la conservation de l’Asp. L’Asp se dégrade facilement en acide salicylique (Ac.sal) qui est le produit de dégradation et le métabolite actif. Puis, une méthode CLHP a été mise au point séparant l’Asp et Ac.sal. Nous avons choisi la concentration finale en Asp selon la réponse optique entre 200 et 300 nm ainsi que la plage de concentrations pour le dosage de l’Asp dans les gélules de 5 et 20 mg. La méthode a ensuite été validée (fidélité et linéarité) avec détermination de la limite de quantification (LOQ) de l’ac.sal. Des contrôles qualités (CQ) d´Asp et d´Ac.sal sont congelés ainsi que la solution mère d’Asp utilisée pour la gamme.
Résultats & discussion : Le dosage est réalisé avec une gamme de 0,1-0,25-0,5 mg/mL encadrant nos points d’intérêt pour l’Asp, avec des CQ à 0,25 mg/mL pour le suivi des matières premières.
Seul l’acétonitrile permet de conserver l’Asp sans dégradation partielle rapide en Ac.sal. Cette dégradation est observée à température ambiante à partir de 1h pour l’eau, le sérum physiologique et le méthanol.
Les conditions opératoires retenues sont : une colonne greffée d’un biphényle Macherey-Nagel Nucleodur π2 75x 4mm comme phase stationnaire, un mélange à 95% d’un tampon d’acétate d’ammonium pH6 5mM et de 5% d’acétonitrile comme phase mobile, un débit de 1.2mL/min, une température d’analyse de 35°C, un temps d’analyse de 3 minutes et un volume d’injection de 1μL. La sélectivité est de 2,48 (> 1)et une résolution est de 1,7 (> 1,5).
Validation de la méthode : La mesure du signal est en aire. La méthode est linéaire entre 0 et 0.5mg/mL avec un coefficient de corrélation moyen (r) de 0,999 et un coefficient de variation (CV) de 0,041%. La méthode est fidèle : la répétabilité moyenne sur les 3 points de gamme est de 0,41% et la reproductibilité moyenne de 2,02%. L’exactitude relative moyenne est de +0,542% (-0,161; +1.352%).
La LOQ de l’ac.sal est de 2,5*10-4 mg/mL correspondant à 0,1% de la concentration dosée en Asp dans les gélules. Le dosage de l’Ac.sal a été également validé et fournit des résultats similaires à ceux de l’Asp pour la fidélité, linéarité et l’exactitude.
Conclusion : Ce travail a permis la validation du dosage par CLHP pour application au dosage de gélules d’Asp produites. Le contrôle libératoire est constitué, en sus des échantillons traités du lot produit, une gamme en 3 trois points et un CQ à la concentration correspondante du lot dosé.
Mots clés : méthode de dosage, préparations hospitalières, contrôle libératoire
L’objectif est de développer une méthode de dosage de l’Asp afin de libérer les lots produits.
Matériels & méthode : Premièrement, nous avons choisi le meilleur solvant en fonction de la solubilisation et de la conservation de l’Asp. L’Asp se dégrade facilement en acide salicylique (Ac.sal) qui est le produit de dégradation et le métabolite actif. Puis, une méthode CLHP a été mise au point séparant l’Asp et Ac.sal. Nous avons choisi la concentration finale en Asp selon la réponse optique entre 200 et 300 nm ainsi que la plage de concentrations pour le dosage de l’Asp dans les gélules de 5 et 20 mg. La méthode a ensuite été validée (fidélité et linéarité) avec détermination de la limite de quantification (LOQ) de l’ac.sal. Des contrôles qualités (CQ) d´Asp et d´Ac.sal sont congelés ainsi que la solution mère d’Asp utilisée pour la gamme.
Résultats & discussion : Le dosage est réalisé avec une gamme de 0,1-0,25-0,5 mg/mL encadrant nos points d’intérêt pour l’Asp, avec des CQ à 0,25 mg/mL pour le suivi des matières premières.
Seul l’acétonitrile permet de conserver l’Asp sans dégradation partielle rapide en Ac.sal. Cette dégradation est observée à température ambiante à partir de 1h pour l’eau, le sérum physiologique et le méthanol.
Les conditions opératoires retenues sont : une colonne greffée d’un biphényle Macherey-Nagel Nucleodur π2 75x 4mm comme phase stationnaire, un mélange à 95% d’un tampon d’acétate d’ammonium pH6 5mM et de 5% d’acétonitrile comme phase mobile, un débit de 1.2mL/min, une température d’analyse de 35°C, un temps d’analyse de 3 minutes et un volume d’injection de 1μL. La sélectivité est de 2,48 (> 1)et une résolution est de 1,7 (> 1,5).
Validation de la méthode : La mesure du signal est en aire. La méthode est linéaire entre 0 et 0.5mg/mL avec un coefficient de corrélation moyen (r) de 0,999 et un coefficient de variation (CV) de 0,041%. La méthode est fidèle : la répétabilité moyenne sur les 3 points de gamme est de 0,41% et la reproductibilité moyenne de 2,02%. L’exactitude relative moyenne est de +0,542% (-0,161; +1.352%).
La LOQ de l’ac.sal est de 2,5*10-4 mg/mL correspondant à 0,1% de la concentration dosée en Asp dans les gélules. Le dosage de l’Ac.sal a été également validé et fournit des résultats similaires à ceux de l’Asp pour la fidélité, linéarité et l’exactitude.
Conclusion : Ce travail a permis la validation du dosage par CLHP pour application au dosage de gélules d’Asp produites. Le contrôle libératoire est constitué, en sus des échantillons traités du lot produit, une gamme en 3 trois points et un CQ à la concentration correspondante du lot dosé.
Mots clés : méthode de dosage, préparations hospitalières, contrôle libératoire